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产品简介

RIPA裂解液(RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay)是一种传统的细胞组织快速裂解液，主要用于从动物细胞和组织中提取可溶性蛋白，其裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western Blot、IP及Elisa等实验。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解强度大致可以分为强、中、弱三类。用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以使用 BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。

注意事项：
需自备PMSF。 也可以选购总体效果更佳的 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物或者根据具体用途选择。如所需提取的为磷酸化蛋白，还需在裂解液中按1:100(V/V)加入 磷酸酶抑制剂 。
裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。在使用前数分钟内将 蛋白酶抑制剂 按1:100(V/V)加入其中。

使用说明

1、样品前处理：

a)对于贴壁细胞：

去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

b)对于悬浮细胞：

离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

c)对于组织样品：

把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。

用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

2、后处理：

将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE凝胶电泳、Western和免疫沉淀等操作。

注意事项 ：

本试剂为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，造成细胞裂解液粘稠，此时可以直接加入蛋白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，可入加少量 SDS（1%），煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。

如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清用于后续实验。