产品介绍
内毒素是质粒提取中常见的污染物,由于真核细胞对内毒素非常敏感,因此,如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细 胞转染效率。本试剂盒采用独特的硅基质膜吸附技术,高效专一的结合质粒 DNA;同时采用新型内毒素清除剂(ER)快速去 除内毒素、蛋白等杂质,内毒素水平可低于 0.1 EU/μg,适用于提取 100-200 ml 过夜培养的大肠杆菌。溶液包含指示剂,指 示裂解、中和是否完全,实现操作的可视化,确保质粒提取的质量。质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件,细胞 的裂解,质粒拷贝数,质粒的稳定性,抗生素等因素有关。
使用本试剂盒提取的质粒 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转 染一些常规的传代细胞等。
注意事项(请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1) 低温时先检查 Buffer P2 中是否出现浑浊,如果有浑浊现象,可在 42℃水浴中加热几分钟,即可恢复澄清。
2) 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10 kb 的大质粒,应加大菌 体使用量,同时按照比例增加 P1、P2、P4 的用量,洗脱缓冲液应在 65-70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间, 以增加提取效率。
3) Buffer P1 在使用前先加入 RNase A 溶液(将试剂盒提供的 RNase A 全部加入,终浓度 100 μg/ml),混匀后可 4℃保存 6 个月。如果 Buffer P1 中 RNase A 失活,提取的质粒可能会有微量 RNA 残留,在 Buffer P1 中补加 RNase A 即可。
4) 第一次使用前请先在 Buffer WB2 瓶加入标签指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框内打钩标记,以免重复加 入! 5) Buffer EB 中不含有螯合剂 EDTA 成分,不影响下游酶切、连接等反应。